NGUYÊN LÝ
Theo phương pháp enzym quang học (GOD- PAP).
Xác định nồng độ glucose sau khi oxy hoá glucose bằng glucooxidase (GOD), peroxide hydrogen được tạo thành tác dụng với 4-aminoantipyrin và phenol nhờ xúc tác của peroxidase (POD) tạo phức hợp màu quinoimin, theo các phản ứng sau:
Glucose oxidase
Glucose + O2 ————————–> Gluconic acid + H2O2
Peroxidase
H2O2 + Phenol + 4-aminoantipyrin ———————-> Quinonimin + 4 H2O
(Đỏ quinon)
Đo mật độ quang ở bước sóng 546 nm, so với glucose chuẩn sẽ tính được kết quả.
CHUẨN BỊ
Người thực hiện
Bác sĩ hoặc kỹ thuật viên được đào tạo về chuyên nhành xét nghiệm Hóa sinh.
Phương tiện, hóa chất
Thuốc thử và chất thử:
Thuốc thử: loại thuốc thử của hãng Human, thành phần gồm có:
Đệm phosphat (pH = 7,5) 250 mmol/l.
Phenol 5 mmol/l.
4-aminoantipyrin 0,5 mmol/l.
Glucooxidase (GOD) ≥ 10 kU/l.
Dung dịch glucose chuẩn 5,55 mmol/l (1g/l).
Chất thử: huyết thanh, huyết tương chống đông bằng Heparin hoặc EDT.
Người bệnh
Người bệnh cần được giải thích về việc cần thiết làm xét nghiệm.
Phiếu xét nghiệm
Phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ các thủ tục hành chính: họ tên người bệnh, tuổi, mã số người bệnh, khoa phòng, tên xét nghiệm chỉ định, khoảng tham chiếu, bác sĩ chỉ định xét nghiệm, ngày giờ lấy mẫu, người lấy mẫu, ngày giờ nhận mẫu bệnh phẩm, người nhận mẫu.
Ghi yêu cầu xét nghiệm: Định lượng nồng độ glucose.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Lấy bệnh phẩm
Định lượng glucose các dịch cần ly tâm thu lấy dịch trong để định lượng.
Tiến hành kỹ thuật
Tiến hành trên máy 4010”
Đặt chế độ máy: chương trình C/St.
Bước sóng 500 nm hoặc 546 nm.
Nhiệt độ 20, 25oC hoặc 37oC.
Hệ số (F): 5,55.
Cách tiến hành: cho thuốc thử vào 3 ống nghiệm nhỏ theo bảng sau:
|
Thuốc thử |
Ống trắng (-) |
Ống chuẩn (S) |
Ống thử (T) |
|
Thuốc thử H2O D. d glucose chuẩn Bệnh phẩm |
1 ml 10 µl – – |
1 ml – 10 µl – |
1 ml – – 10 µl |
Trộn đều, ủ 20 phút/ 20 – 25ºC hoặc 10 phút/ 37ºC.
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Bình thường không có glucose trong các dịch chọc dò.
NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
