ĐỊNH LƯỢNG CHOLESTEROL TOÀN PHẦN – DỊCH CHỌC DÒ
NGUYÊN LÝ
Cholesterol ester có trong dịch chọ dò được chuyển thành cholesteron và H2O2 do các enzym cholesterol esterase xúc tác. Sau đó cholesteron bị oxy hoá tạo thành H2O2 và cholestentrione. H2O2 kết hợp với chất hiện màu nhờ tác dụng của enzym perosidase để chuyển thành hợp chất có màu đỉnh hấp thụ cực đại ở 532 nm.
Cholesterol esterase
Cholesterol esters ——————————> Cholesterol + acid béo tự do
Cholesterol oxidase
Cholesterol + O2 ——————————> 4 Cholesten-3-one + H2O2
POD
2H2O2 + phenol + 4 Amino antipyrin ——————-> Quinoneimin + 4 H2O
CHUẨN BỊ
Người thực hiện
Bác sĩ hoặc kỹ thuật viên được đào tạo về chuyên nhành xét nghiệm Hóa sinh.
Phương tiện, hóa chất
Máy xét nghiệm bán tự động H5000, 4010, evolution…
Máy tự động hoàn toàn AU 400, 640, 2700 (hãng Beckman coulter).
Kit của hãng Beckman coulter.
R1: Buffer (dung dịch đệm)
Phosphate buffer (pH = 6.5), Chloro – 4 – phenol
Sodium Cholate, Triton
R2: Enzyme
Cholesterol oxydase (CO)
Cholesterol esterase (CE)
Peroxidase (POD)
4 – amino – antipyrin (PAP)
R3: Standard
Cholesterol 200 mg/dL (5,17 mmol/l).
Người bệnh
Người bệnh cần được tư vấn trước khi làm xét nghiệm.
Phiếu xét nghiệm
Phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ các thủ tục hành chính: họ tên người bệnh, tuổi, mã số người bệnh, khoa phòng, tên xét nghiệm chỉ định, khoảng tham chiếu, bác sĩ chỉ định xét nghiệm, ngày giờ lấy mẫu, người lấy mẫu, ngày giờ nhận mẫu bệnh phẩm, người nhận mẫu.
Ghi yêu cầu xét nghiệm: Định lượng nồng độ cholesterol.
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Lấy bệnh phẩm Dịch chọc dò
Tiến hành kỹ thuật Cho vào 3 ống nghiệm
|
|
Ống trắng |
Ống chuẩn |
Ống thử |
|
Thuốc thử |
1 ml |
1 ml |
1 ml |
|
Nước cất |
10 µl |
|
|
|
Chuẩn Cholesterol |
|
10 µl |
|
|
Mẫu thử |
|
|
10 µl |
Lắc đều, ủ 370C trong 5 phút hoặc 10 phút ở nhiệt độ phòng. Đo mật độ quang học ở bước sóng = 500 nm (480 – 520 nm) so với ống chuẩn để tính kết quả.
Tính kết quả: Nồng độ ống mẫu.
CU= ODU/ ODS * CS (mg/dL hoặc mmol/l)
ODU là mật độ hấp thu của ống mẫu
ODS là mật độ hấp thu của ống chuẩn
CU là nồng độ Cholesterol mẫu
CS là nồng độ Cholesterol chuẩn
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Bình thường không có cholesterol toàn phần trong dịch chọc dò
NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
