PHÂN LẬP TẾ BÀO GỐC
BẰNG ỐNG LY TÂM 50ml, KHÔNG DÙNG HÓA CHẤT
(Stem cell isolation by falcon 50ml centrifuge tube without additional reagents)
NGUYÊN LÝ
Các thành phần trong dịch tủy xương, khối tế bào gốc từ máu ngoại vi, máu dây rốn có tỷ trọng và độ nhớt khác nhau nên khi ly tâm sẽ phân tách thành các lớp khác nhau, qua đó loại bỏ phần lớn hồng cầu, tiểu cẩu, huyết tương ra khỏi mẫu để thu được sản phẩm có chứa nhiều tế bào gốc.
Nguồn gốc kỹ thuật: Áp dụng từ quy trình tách khối buffy – coat kinh điển dùng trong miễn dịch và huyết học.
CHỈ ĐỊNH
Phân lập tế bào gốc từ:
Khối tế bào gốc gạn tách từ máu ngoại vi;
Máu dây rốn;
Dịch hút tủy xương.
CHỐNG CHỈ ĐỊNH
Không có chống chỉ định.
CHUẨN BỊ
Người thực hiện:
Người đã được đào tạo thực hiện kỹ thuật.
Phương tiện:
Tủ an toàn sinh học có đèn cồn;
Máy ly tâm lạnh có cóng văng cho ống ly tâm 50ml;
Ống ly tâm 50ml (ống Falcon);
Pipet điện hút chân không;
Pipet paster thủy tinh và quả bóp; pipet thủy tinh/nhựa loại 10 – 20ml;
Các ống đong thủy tinh 100 ml, 250 ml; cốc thủy tinh;
Lưới thép mịn;
Bơm tiêm 15 ml, 20 ml; kim 18G;
Bông gạc vô trùng; bông cồn ethanol 70o và cồn iod.
Tất cả các thiết bị, dụng cụ đều được tiệt trùng.
Mẫu nguyên liệu
Dịch hút tủy xương, máu dây rốn, túi tế bào gốc tách từ máu ngoại
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Thời gian thực hiện: càng sớm càng tốt, ngay khi mẫu tế bào gốc được đưa đến phòng labo;
Người thực hiện: kỹ thuật đi găng tay, đội mũ, đeo khẩu trang;
Khử trùng tay, găng tay bằng cồn ethanol 70o;
Lấy 1 ml mẫu trước xử lý để xét nghiệm: tổng phân tích tế bào máu, tế bào CD34, tỷ lệ tế bào sống chết trước xử lý;
Nếu là dịch hút tủy xương:
+ Lọc dịch qua lưới lọc để loại bỏ cục máu đông, mảnh xương trong các ống dịch tủy;
+ Sau đó pha loãng dịch tủy xương 2 lần bằng dung dịch NaCl 0,9%.
Ly tâm chuẩn 4.700 vòng trong 10 phút, tách thành 3 lớp: huyết tương buffy coat – hồng cầu;
Dùng pipete thủy tinh vô khuẩn hút bỏ tối đa lớp hồng cầu và lớp huyết tương giầu tiểu cầu. Tránh làm mất lớp buffy – coat;
Lắc đều và dồn dịch tủy từ 2 – 3 ống vào 1 ống;
Lặp lại bước 6 và 7 cho tới khi loại bỏ được tối đa hồng cầu và huyết tương giầu tiểu cầu;
Votex lắc trộn khối Buffy – coat cô đặc, có thể rửa bằng nước muối sinh lý và đưa về thể tích yêu cầu;
Lấy 1 ml mẫu sau xử lý để xét nghiệm đánh giá kết quả;
Kết thúc quy trình:
Ghi thể tích mẫu trước xử lý, thể tích sau xử lý;
Thực hiện xét nghiệm đánh giá: số lượng tế bào máu, tế bào CD34, tỷ lệ tế bào sống sau xử lý;
Hoàn thiện và lưu hồ sơ.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Shinisuke Sakai, Hajime Mishima, Tomoo Ishii, et al. (2008). Concentration of bone marrow aspirate for osteogenic repair using simple centrifugal methods. Acta Orthopaedica; 79 (3): 445–448
