Nội dung

Treponema pallidum nhuộm huỳnh quang

Mục đích và nguyên lý

Mục đích

Phát hiện nhanh Treponema pallidum từ bệnh phẩm của người.

Nguyên lý

Nếu trong bệnh phẩm có Treponema pallidum, vi khuẩn sẽ kết hợp với kháng thể đặc hiệu gắn huỳnh quang. Khi soi dưới kính hiển vi huỳnh quang sẽ thấy hình ảnh xoắn khuẩn phát sáng màu vàng xanh.

Chuẩn bị

Người thực hiện:

Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.

Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.

Phương tiện, hóa chất (ví dụ hoặc tương đương)

Trang thiết bị

Tủ an toàn sinh học cấp 2

Kính hiển vi huỳnh quang

Dụng cụ sấy lam (nếu có)

Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

STT

Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao

Đơn vị

1

Lọ lấy bệnh phẩm

lọ

2

Que lấy bệnh phẩm

cái

3

Lam kính

cái

4

Nước muối sinh lý

ml

5

Thuốc nhuộm Treponema pallidum DFA

ml

6

Bông

kg

7

Cồn 900 (vệ sinh dụng cụ)

ml

8

Đèn cồn

cái

9

Panh

cái

10

Khay đựng bệnh phẩm

cái

11

Hộp vận chuyển bệnh phẩm

cái

12

cái

13

Khẩu trang

cái

14

Găng tay

đôi

15

Găng tay xử lý dụng cụ

đôi

16

Quần áo bảo hộ

bộ

17

Acid ngâm lam

ml

18

Ống nghiệm thủy tinh

ống

19

Bút viết kính

cái

20

Bút bi

cái

21

Bật lửa

cái

22

Sổ lưu kết quả xét nghiệm

tờ

23

Cồn sát trùng tay nhanh

ml

24

Dung dịch xà phòng rửa tay

ml

25

Khăn lau tay

cái

26

Giấy trả kết quả xét nghiệm

tờ

27

QC (nếu thực hiện) *

 

28

Ngoại kiểm (EQAS) (nếu thực hiện) *

 

*Ghi chú:

Chi phí nội kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình nội kiểm (QC) là 1/10 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lượng ≥ 10 mẫu cho 1 lần tiến hành kỹ thuật).

Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).

Bệnh phẩm

Dịch cơ thể nghi ngờ có căn nguyên do Treponema pallidum gây bệnh: Tổn thương loét, đào ban, vết trợt, hạch…

Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu

Các bước tiến hành

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

Lấy bệnh phẩm

Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục).

Tiến hành kỹ thuật

Chuẩn bị tiêu bản

Nhuộm treponema pallidum dfa (direct fluorescent antibody)

Phủ dung dịch nhuộm huỳnh quang lên tiêu bản, để 2 phút

Rửa lại bằng nước để loại bỏ huỳnh quang thừa rồi để khô, soi dưới kính hiển vi huỳnh quang.

Nhận định kết quả

Treponema pallidum có hình ảnh xoắn khuẩn, bắt màu vàng xanh trên nền tím đen dưới kính hiển vi huỳnh quang.

Những sai sót và xử trí

Có thể gây âm tính giả nếu số lượng vi khuẩn quá ít.