Kỹ thuật xét nghiệm hóa mô miễn dịch

Đại cương

Hóa mô miễn dịch là một xét nghiệm để tìm sự hiện diện của các kháng nguyên có mặt trong tế bào và mô, được làm trên các lát cắt mô nhằm xác định nguồn gốc và bản chất của tế bào và mô giúp cho chẩn đoán, điều trị và tiên lượng bệnh. Vì kháng nguyên không thể quan sát hình thái được nên người ta phải xác định vị trí của nó trên tế bào bằng các phản ứng miễn dịch và hóa học.

Chỉ định

Xác định nguồn gốc của những u không biệt hóa, không xác định được nguồn gốc bằng mô học thường quy;

Xác định sự có mặt của một số kháng nguyên liên quan đến điều trị và tiên lượng bệnh, đặc biệt trong ung thư (Xác định thụ thể estrogen, progesteron trên tế bào ung thư tuyến vú, ung thư nội mạc tử cung, ung thư buồng trứng. Xác định tế bào chế tiết TSH, ACTH, HCG, hGH, Lactabumin … trong các u thuộc hệ nội tiết); -Chẩn đoán phân biệt u lành và ung thư (ít giá trị).

Chuẩn bị

Người thực hiện

Bác sĩ chuyên khoa giải phẫu bệnh có kinh nghiệm và hiểu biết sâu về hóa mô miễn dịch.

Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh.

Phương tiện

Dụng cụ, máy móc: Micropipete (từ 1-1000), cân điện tử, nồi áp suất chuyên dụng, lò vi sóng, máy đo pH, hộp ủ tiêu bản, tủ lạnh, tủ ấm, máy cắt tiêu bản, bếp điện, máy nhuộm, lam kính, lamen).

Hóa chất: Silane, kháng thể, các kít phát hiện, Diamino-Bezidin, Hematoxylin, nước cất, cồn 90⁰, cồn tuyệt đối, dung dịch Citrate-Buffer PH6, dung dịch TrisBuffer-Saline (TBS) pH 7,6, dung dịch pha kháng thể, dung dịch H₂0₂.

Các bước tiến hành

Chuẩn bị tiêu bản: Bệnh phẩm cắt mỏng 3-4 micromet đặt lên lam kính đã được sử lý nhúng với dung dịch silane. Tiêu bản phải được đặt trong tủ ấm 60⁰C ít nhất 1 giờ.

Tiêu bản sau khi tẩy paraffin được nhúng vào nước cất 2 lần x 5 phút.

Khử peroxidase nội sinh bằng dung dịch H₂O₂ 3% x 5 phút.

Rửa tiêu bản bằng dung dịch Tris- Buffer- Saline (TBS) pH 7,6 x 5 phút

Khử các protein không đặc hiệu bằng Bovine- Serum- Albumine x 5 phút

Rửa tiêu bản bằng dung dịch TBS 2 lần x 5 phút, không để khô tiêu bản

Phủ kháng thể kháng kháng nguyên đầu x 60 phút

Rửa TBS 2 lần x 5 phút

Phủ Biotinylated Secondary Antibody x 30 phút

Rửa TBS 2 lần x 5 phút

Phủ phức hợp Avidin-Biotin (ABC) x 30 phút

Rửa TBS 2 lần x 5 phút

Phủ  dung dịch Diamino Benzidine (DAB) x 10 phút

Rửa nước chảy x 5 phút

Nhuộm Hematoxyline 5 giây

Khử nước, làm sạch tiêu bản, gắn lamen.

Đọc kết quả

Đọc kết quả dưới kính hiển vi quang học. Dựa vào vị trí kháng nguyên trong mô để từ đó xác định chẩn đoán. Phản ứng dương tính khi màng bào tương hoặc nhân, hoặc bào tương hoặc cả bào tương và màng bắt màu nâu đỏ.