Nguyên tắc
Phương pháp này nhằm nâng cao hiệu quả phát hiện sớm các tế bào tiền ung thư, ung thư cổ tử cung. Đây là kỹ thuật tế bào chất lỏng thế hệ 2, không ảnh hưởng đến môi trường, thiết bị đơn giản, có thể lưu trữ bệnh phẩm để xét nghiệm lại khi cần (không phải mời Người bệnh đến lấy lại bệnh phẩm tế bào như các phương pháp khác), có thể sử dụng bệnh phẩm cho phân tích các thụ thể, gen, các tác nhân gây bệnh, hóa miễn dịch tế bào… chỉ trong 1 lần lấy bệnh phẩm. Dùng các hóa chất hòa tan chất nhầy và hồng cầu để các thành phần này không che lấp các tế bào cần quan sát, cũng như dùng chất dính để các tế bào như được dán lên phiến kính, không bị trôi khi nhuộm. Các tế bào không bị chồng chất lên nhau, nên rất dễ quan sát, do đó tăng độ nhậy, độ chính xác, giảm tỷ lệ âm tính giả.
Chuẩn bị
Người thực hiện
Bác sĩ chuyên khoa sản phụ hoặc bác sĩ đã được tập huấn cách lấy bệnh phẩm: 01
Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh – tế bào bệnh học: 01
Phương tiện, hóa chất
Các dụng cụ để lấy tế bào cổ tử cung – âm đạo (như ở mục quy trình làm phiến đồ tế bào cổ tử cung – âm đạo, chỉ thay quệt bẹt bằng chổi lấy tế bào).
Máy ly tâm 50 ống, tốc độ từ 1000-2000 vòng/phút.
Các ống ly tâm,lọ đựng bệnh phẩm có chất cố định.
Máy trộn lắc votex: dùng để đánh tan chất nhầy cũng như trộn đều tế bào.
Ống hút tự động loại 20 đến 200µ và loại 500 đến 6000µ.
Dung dịch làm sạch (Cleaning Solution).
“Chất dính” (Cell base).
Phiến kính, lá kính sạch.
Cồn 50o, 70o, 80o, 90o. 95o, 100o.
Phẩm nhuộm Papanicolaou.
Kính hiển vi quang học (kiểm tra chất lượng phiến đồ sau khi nhuộm), Hộp đựng phiến đồ. Kính hiển vi chụp ảnh (để minh họa).
Các bước tiến hành
Lấy bệnh phẩm
Người bệnh được khám phụ khoa, lấy tế bào cổ tử cung vùng chuyển tiếp bằng chổi nilon (hình dưới).
Hình 29. Các bước lấy tế bào và đưa vào lọ chứa dung dịch bảo quản mẫu.
Lấy mẫu bằng chổi tế bào cổ tử cung (Cervix Brush®): đưa chổi vào cổ tử cung, phần lông dài ở giữa nằm ở trong ống cổ tử cung. Xoay chổi 2-3 lần quanh bề mặt cổ tử cung. Rút cây chổi ra, nhúng vào lọ đựng dung dịch cố định tế bào (Preserv Cyt®). Bật nhẹ để đầu chổi nằm lại trong lọ đựng dung dịch cố định và lấy cán chổi ra. Đậy nắp lọ cẩn thận.
Ghi đầy đủ các thông tin về người bệnh trên nhãn ngoài lọ cũng như ở phiếu xét nghiệm theo quy định.
Các bước thực hiện tại phòng xét nghiệm
|
Mẫu sau khi lấy tế bào cổ tử cung âm đạo |
Thêm dung dịch làm sạch |
Trộn kỹ mẫu( 45 giây) với máy votex |
Rót mẫu vào ống ly tâm |
|
Ly tâm 10 phút |
Bỏ dịch nổi |
Pha loãng với cell base |
Trộn mẫu trức khi đưa lên phiến kinh |
Dàn bệnh phẩm lên phiến kính |
Hình 30. Minh hoạ kỹ thuật làm phiến đồ Liqui – Prep
Bước 1: cho dung dịch làm sạch vào lọ chứa bệnh phẩm.
Bước 2: trộn kỹ mẫu bằng máy Votex trong 45 giây.
Bước 3: rót mẫu vào ống ly tâm.
Bước 4: ly tâm 1000 vòng/phút trong 10 phút.
Bước 5: gạn bỏ dịch phía trên.
Bước 6: pha loãng mẫu với dung dịch chất dính (Cell base), tỷ lệ 1/3.
Bước 7: trộn đều mẫu trước khi hút đưa lên phiến kính.
Bước 8: dàn dịch lên phiến kính.
Bước 9: nhuộm phiến đồ theo phương pháp Papanicolaou như sau:
|
Cồn 80o nhúng 5 lần (8 – 10 giây) Cồn 70o nhúng 5 lần (8 – 10 giây) Cồn 50o nhúng 5 lần (8 – 10 giây) Nước cất nhúng 5 lần (8 – 10 giây) Hematoxylin Harris: 6 phút Nước cất: nhúng 5 lần Dung dịch HCl 0,25%: nhúng 6 lần Nước chảy: 6 phút Nước cất: 5 lần nhúng Cồn 50o nhúng 5 lần Cồn 70o nhúng 5 lần Cồn 80o nhúng 5 lần |
Cồn 95o nhúng 5 lần Orange G6: 1 phút 30 giây Cồn 95o: nhúng 5 lần Cồn 95o: nhúng 5 lần (lọ đựng cồn khác) EA 50: 1 phút 30 giây Cồn 95o: nhúng 5 lần Cồn 95o: nhúng 5 lần Cồn 95o: nhúng 5 lần Cồn tuyệt đối: 5 lần nhúng Cồn tuyệt đối – Xylol (1/1): 5 lần nhúng Xylol: 5 lần nhúng Gắn lá kính. |
Kết quả
Phiến đồ mỏng, đều, các tế bào không chồng chất lên nhau, không còn chất nhầy và hồng cầu.
Nhân tế bào: bắt màu xanh xám hay tím rõ.
Bào tương: các tế bào ưa kiềm sẽ bắt màu xanh sáng đôi khi xanh lá cây nhạt, các tế bào ưa acid sẽ bắt màu hồng đỏ hay da cam.
Những sai sót và hướng xử trí
Cần xem xét lượng tế bào nhiều hay ít để pha dung dịch chất dính (cell base). Nếu mật độ tế bào thấp, cần dùng ít dung dịch cell base để có đủ tế bào chẩn đoán.
Lưu ý thời gian nhuộm nhân, không để quá dài, vì nếu nhuộm nhân lâu sẽ làm tăng sắc, có thể dẫn đến nhận định sai.
