NHUỘM CUSTER CHO CÁC MẢNH CẮT TỦY XƯƠNG
Nguyên tắc
Phương pháp nhuộm cho thấy rõ, chi tiết hình thái của tế bào tuỷ xương.
Chuẩn bị
Người thực hiện
Kỹ thuật viên giải phẫu bệnh – tế bào bệnh học: 02
Phương tiện, hóa chất
Phương tiện, hóa chất chung cho kỹ thuật
Dung dịch cố định bệnh phẩm formol Zenker (Helly).
Dung dịch khử calci.
Cồn (700, 800, 950 , 1000).
Xylen hay toluen.
Nước cất 2 lần.
Parafin.
Sáp ong.
Albumin + glycerin.
Máy đo độ pH điện tử.
Máy chuyển bệnh phẩm tự động.
Máy đúc khối parafin.
Bàn hơ dùng điện.
Máy cắt lát mỏng (microtome).
Lưỡi dao cắt lát mỏng.
Lò nấu parafin.
Tủ ấm 370 và 560.
Tủ lạnh.
Điều hòa nhiệt độ.
Tủ hốt phòng thí nghiệm.
Bể nhuộm bằng thủy tinh.
Bể thủy tinh đựng cồn, xylen.
Hộp bằng thép không rỉ đựng parafin.
Khuôn nhựa.
Giá đựng tiêu bản (đứng và nằm ngang).
Cốc đong loại 1000ml, 500ml, 100ml và 50ml.
Ống hút bằng nhựa, quả bóp cao su hút hóa chất.
Kẹp không mấu, kéo.
Cân phân tích.
Giấy lọc.
Phiến kính, lá kính.
Acid picric ngâm, làm sạch phiến kính.
Bôm Canada hoặc keo gắn lá kính.
Kính hiển vi 2 mắt để kiểm tra kết quả nhuộm.
Kính phòng hộ, găng tay các loại, mặt nạ phẫu thuật, áo choàng phẫu thuật.
Nguồn cấp nước chảy.
Phương tiện, hóa chất riêng biệt cho kỹ thuật
Phẩm nhuộm hoặc dùng phẩm nhuộm có sẵn của các hãng hoặc pha như hướng dẫn ở III.6.1 dưới đây, bao gồm: cồn iốt 2%, Na2S2O3 5%, Eosin Y nước 0,1%, Azur II.
Các bước tiến hành
Cố định
Bệnh phẩm sau khi được lấy ra khỏi cơ thể được cố định ngay trong dung dịch formol Zenker (Helly) từ 4 đến 6 giờ với tỷ lệ thể tích dung dịch cố định nhiều gấp 30 lần thể tích bệnh phẩm. Thời gian cố định từ 10-12 giờ.
Sau cố định, bệnh phẩm được thực hiện qua các khâu kỹ thuật sau:
Rửa trong nước chảy 1 giờ.
Khử calci qua đêm (hoặc cho đến khi mảnh xương mềm châm kim vào dễ dàng) trong acid formic 5% hoặc trong dung dịch cải biên của Wagoner (acid formic 85 – 95%, 50ml; trộn với nước cất, 35ml; rồi cho thêm dung dịch Citrat sodium 17g trong 85ml nước cất ấm).
Cắt bỏ vỏ xương.
Rửa nhẹ nhàng trong nước chảy một giờ.
Loại nước bằng cồn ở các nồng độ cao dần.
Làm trong bệnh phẩm.
Chuyển bệnh phẩm
Vùi parafin
Đúc khối parafin
Cắt và dán mảnh cắt
Nhuộm mảnh cắt
Chuẩn bị dung dịch nhuộm
A-Eosin Y nước 0,1%
B-Azur II. Các phần bằng nhau azur A và xanh lơ methylen – nước 0,1% Ngay trước khi dùng, trộn các dung dịch theo các tỷ lệ sau đây:
A: 20ml
B: 10ml
Nước cất : 80ml Lọc qua bông.
Chú ý: nếu mô có nhiều máu, chỉ dùng 5ml dung dịch A.
Các bước nhuộm
Cho mảnh cắt qua xylen, cồn tuyệt đối, cồn 95°.
Loại kết tủa thuỷ ngân bằng cách ngâm nhiều phút trong cồn iốt 2% rồi trong cồn 800, nước chảy, Na2S2O3 5%, nước chảy và thay ba lần nước cất.
Để mảnh cắt dựng đứng khoảng 15 – 16 giờ trong dung dịch nhuộm (đậy kín lọ).
Ngâm trong cồn 950, thay hai lần.
Kiểm tra sự biệt hoá qua kính hiển vi.
Rửa bằng cồn tuyệt đối, hai lần.
Làm trong mảnh cắt bằng xylen, hai lần.
Gắn bôm Canada.
Kết quả
Hồng cầu: da cam
Bào tương của lymphô bào hoặc tế bào non: xanh
Nhân: xanh thẫm tới xanh – tím
Hạt của dưỡng bào (mastocyte): tím tới tím đỏ
Sụn: đỏ tím
Nền của xương: hồng
