Nhuộm sợi xơ trong mô tủy xương (phương pháp sợi collagen van gieson)

NHUỘM SỢI XƠ TRONG MÔ TỦY XƯƠNG

(Phương pháp sợi Collagen Van Gieson)

(Van Gieson’s stain on bone marrow biopsy)

 

NGUYÊN LÝ

Nhuộm sợi collagen là phương pháp kết hợp ba màu gồm: một chất nhuộm nhân Hematoxylinferric, một chất nhuộm bào tương bằng Picro Fuchsin và một màu trọng lực của collagen là Solution Van Gieson.

CHỈ ĐỊNH

Các trường hợp bệnh lý có tăng sinh xơ trong tủy xương (hội chứng tăng sinh tủy…).

CHỐNG CHỈ ĐỊNH

Không có chống chỉ định.

CHUẨN BỊ     

Người thực hiện

01 Kỹ thuật viên hoặc Cử nhân kỹ thuật y có kiến thức chuyên khoa.

Phương tiện – Hóa chất

Dụng cụ

Kính hiển vi quang học;

Máy cắt tiêu bản;

Bàn sấy 37^oC;

Lam kính sạch, mờ một đầu;

Bể nhuộm tiêu bản dung tích 100ml: 06 chiếc;

Bể nhuộm tiêu bản dung tích 200ml: 02 chiếc;

Giá cài tiêu bản vừa bể nhuộm 200ml: 01 chiếc;

Giá gỗ cài tiêu bản: 02 chiếc;

Pipette Pasteur: 05 chiếc;

Gạc thấm nước: 03 chiếc;

Bút chì: 01 chiếc;

Lamen 22 x 24 hoặc 22 x 22

Hóa chất

Toluen 1,2,3: để sẵn trong 3 bể nhuộm 100ml;

Cồn Etylic 80^o, cồn tuyệt đối 1,2 để sẵn trong bể nhuộm 100ml;

Dung dịch Hematoxylinferric;

Dung dịch Picro Fuchsin;

Dung dịch Solution Văn Gieson;

Boom Canada: Để nóng chảy ở 60^oC lượng vừa phải.

Bệnh phẩm

Lốc nến mảnh sinh thiết tủy xương.

Phiếu xét nghiệm

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Chuẩn bị tiêu bản

Đúc khuôn parafin mảnh sinh thiết tủy xương đã được xử lý, làm nguội và để lạnh 2–8^oC.

Cắt tiêu bản mỏng 0,2 µm, dán trên lam kính.

Sấy khô tiêu bản trong tủ ấm 37^oC trong thời gian 3 giờ.

Tiến hành nhuộm

Ngâm tiêu bản trong dung dịch Toluen (15 phút), cồn 80^o (5 phút) và cồn tuyệt đối (10 phút);

Rửa dưới dòng nước chảy nhẹ: 5 phút;

Nhuộm dung dịch Hematoxylinferric: 5–10 phút;

Rửa dưới nước chảy nhẹ: 5 phút;

Nhuộm trong dung dịch Picro Fuchsin: 3–5 phút;

Rửa dưới nước chảy nhẹ: 5 phút;

Nhuộm dung dịch Solution Van Gieson: 1– 3 phút;

Rửa dưới nước chảy nhẹ: 5 phút;

Nhúng trong cồn 95^o: 10 giây;

Loại bỏ nước bằng cồn tuyệt đối;

Loại bỏ cồn, làm trong bằng Toluen;

Gắn Boom Canada và sấy khô tiêu bản.

NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

Việc nhận định kết quả được tiến hành trên kính hiển vi quang học. Các sợi Collagen có màu đỏ đậm trên nền nhân tế bào có màu xanh đen.

NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ

Tiêu bản không được đảm bảo gắn chặt trên lam, thời gian để khô chưa đạt;

Rửa nước không kỹ sau mỗi bước nhuộm hóa chất;

Thời gian nhuộm không đúng quy trình chuẩn, hoặc tùy kích thước của bệnh phẩm mà có thời gian nhuộm khác nhau;

Kỹ năng chuyên môn của kỹ thuật viên chưa tốt.