Dengue virus ns1ag miễn dịch bán tự động

Mục đích và nguyên lý

Mục đích

Phát hiện kháng nguyên NS1 của virus Dengue trong mẫu huyết thanh hoặc huyết tương của người.  

Nguyên lý

Dựa trên nguyên lý kỹ thuật ELISA (miễn dịch gắn enzym) gián tiếp (VD).

Chuẩn bị

Người thực hiện

Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.

Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.

Phương tiện, hóa chất (ví dụ hoặc tương đương)

Trang thiết bị

Dàn máy ELISA 

Máy ly tâm

Tủ lạnh 4⁰C – 8⁰C

Tủ âm sâu (-20⁰C) hoặc (-70⁰C) (nếu có)

Các pipet đơn kênh thể tích từ 10µl đến 1000µl .

Micropipette

Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

STT		Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao		Đơn vị
1		Bông		Kg
2		Dây garô		Cái
3		Cồn		ml
4		Bơm kim tiêm		Cái
5		Panh		Cái
6		Khay đựng bệnh phẩm		Cái
7		Hộp vận chuyển bệnh phẩm		Cái
8		Tube đựng bệnh phẩm		Cái
9		Sinh phẩm chẩn đoán		Test
	10		Khấu hao sinh phẩm cho chạy chứng, kiểm tra chất
			lượng		Test
	11		Nước cất		ml
	12		Đầu côn 1000 µl		Cái
	13		Đầu côn 200 µl		Cái
	14		Giấy thấm		Cuộn
	15		Giấy xét nghiệm		Tờ
	16		Sổ lưu kết quả xét nghiệm		Tờ
	17		Bút viết kính		Cái
	18		Bút bi		Cái
	19		Mũ		Cái
	20		Khẩu trang		Cái
	21		Găng tay		Đôi
	22		Găng tay xử lý dụng cụ		Đôi
	23		Quần áo bảo hộ		Bộ
	24		Dung dịch xà phòng rửa tay		ml
	25		Cồn sát trùng tay nhanh		ml
	26		Dung dịch khử trùng		ml
	27		Khăn lau tay		Cái
	28		Ngoại kiểm (EQAS) (nếu thực hiện)*

Ghi chú: 

Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 3 lần/1 năm).

Bệnh phẩm

Huyết thanh hoặc huyết tương. 

Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu.

Các bước tiến hành

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

Lấy bệnh phẩm

Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục).

Tiến hành kỹ thuật

Các bước	Nội dung
1	Để số lượng sinh phẩm cần dùng   nhiệt độ phòng 30 phút trước khi làm xét nghiệm
2	Đánh số, sắp xếp bệnh phẩm và viết sơ đồ theo thứ tự.
3	Chuẩn bị dung dịch rửa.
4	Pha loãng chứng và mẫu bệnh phẩm.
5	Lấy đ  số giếng cần dùng và đ t vào giá.
6	Rửa các giếng1 lần bằng dung dịch rửa đã pha loãng.
7	Cho chứng và bệnh phẩm vào các giếng của phiến nhựa theo hướng dẫn của qui trình.
8	Đậy tấm và ủ .
9	Rửa phiến nhựa.
10	Chuẩn bị chất cộng hợp
11	Đậy tấm và ủ
12	Rửa phiến nhựa
13	Nhỏ dung dịch hiện màu  vào mỗi giếng
14	phiến nhựa , không đậy tấm và tránh ánh sang
15	Nhỏ dung dịch dừng phản ứng
16	Đọc độ hấp thụ   bước sóng 450 và 620nm trong vòng 30 phút sau khi dừng phản ứng.

Nhận định kết quả

Điều kiện của phản ứng

Chứng ngưỡng: OD > 0,2. 

Chứng âm: Tỷ số OD chứng âm/OD chứng ngưỡng

Chứng dương: Tỷ số OD chứng dương/OD chứng ngưỡng > 1,5

Nếu một trong các điều kiện trên không đạt, phải chạy lại xét nghiệm

Tính giá trị ngưỡng:

Cut-off  (CO) = Giá trị trung bình của các cut-off          

Tính tỷ số mẫu: 

Tỷ số mẫu = giá trị OD của mẫu/OD của ngưỡng

Diễn giải kết quả

Dương tính: khi tỷ số mẫu > 1

Nghi ngờ: nếu 0,5 ≤ tỷ số mẫu

Âm tính: khi tỷ số mẫu

Những sai sót và xử trí

Sai sót

Có thể xảy ra hiện tượng âm tính giả hoặc dương tính giả, thông thường do: 

Thực hiện sai các bước trong quy trình hướng dẫn. 

Chứng âm và những mẫu bệnh phẩm âm tính bị nhiễm chéo bởi huyết thanh/ huyết tương có nồng độ kháng thể cao.

Dung dịch cơ chất bị nhiễm bởi các tác nhân oxid hoá (thuốc tẩy, ion kim loại v.v…) 

Dung dịch dừng phản ứng bị nhiễm bẩn.

Xử trí 

Tuân thủ đúng các bước qui trình hướng dẫn của nhà sản xuất và hướng dẫn về độ ổn định hóa chất xét nghiệm trong bộ sinh phẩm sử dụng.

Kiểm tra và vệ sinh máy rửa thường xuyên trước và sau khi làm xét nghiệm.