NGUYÊN LÝ
LDH được đo dựa theo phản ứng:
LDH
Acid Pyruvic + NADH2 —————> Acid Lactic + NAD+
Hoạt độ LDH được đo bằng sự giảm theo thời gian của NADH2 ở bước sóng 340nm.
CHUẨN BỊ
Người thực hiện
Bác sĩ hoặc kỹ thuật viên được đào tạo về chuyên nhành xét nghiệm Hóa sinh.
Phương tiện, hóa chất
Máy xét nghiệm bán tự động H5000, 4010, evolution…
Máy tự động hoàn toàn AU 400, 640, 2700 (hãng Beckman coulter).
Kit thuốc thử LDH (hãng Beckman coulter).
Thuốc thử R1: Đệm pH 7,5.
Phosphat: 50 mmol/l.
Acid Pyruvic: 0,6 mmol/l.
Thuốc thử R2: Cơ chất NADH2: 0,18 mmol/l.
Người bệnh
Người bệnh cần được giải thích về việc cần làm xét nghiệm.
Phiếu xét nghiệm
Phiếu xét nghiệm cần ghi đầy đủ các thủ tục hành chính: họ tên người bệnh, tuổi, mã số người bệnh, khoa phòng, tên xét nghiệm chỉ định, khoảng tham chiếu, bác sĩ chỉ định xét nghiệm, ngày giờ lấy mẫu, người lấy mẫu, ngày giờ nhận mẫu bệnh phẩm, người nhận mẫu.
Ghi yêu cầu xét nghiệm: Xác định hoạt độ LDH
CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH
Lấy bệnh phẩm
Định lượng LDH các dịch cần ly tâm thu lấy dịch trong để định lượng.
Tiến hành kỹ thuật
Pha thuốc thử R1 và R2 theo tỷ lệ 1:1. Cho vào 3 ống nghiệm.
|
|
Ống trắng |
Ống chuẩn |
Ống thử |
|
Thuốc thử |
1 ml |
1 ml |
1 ml |
|
Nước cất |
10 µl |
|
|
|
Chuẩn |
|
10 µl |
|
|
Mẫu thử |
|
|
10 µl |
Lắc đều, ủ 37ºC trong 5 phút hoặc 10 phút ở nhiệt độ phòng. Đo mật độ quang học ở bước sóng 340 nm so với ống chuẩn để tính kết quả.
Tính kết quả: Nồng độ ống mẫu. CU= ODU/ ODS * CS (U/l).
ODU là mật độ hấp thu của ống mẫu.
ODS là mật độ hấp thu của ống chuẩn.
CU là hoạt độ LDH mẫu.
CS là hoạt độ LDH chuẩn.
Chú ý: Có thể tiến hành trên máy bán tự động cài đặt chương trình với các thông số như trên. Khi làm, đo mật độ quang của ống trắng trước. Sau đó đưa vào ống chuẩn máy sẽ tự động đo và tính ra hệ số. Tiếp đó đưa theo thứ tự các ống thử vào máy sẽ tự động đo và tính ra kết quả hiện trên máy hoặc in ra giấy.
NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ
Bình thường không có LDH trong dich chọc dò.
NHỮNG SAI SÓT VÀ XỬ TRÍ
