Mục đích và nguyên lý
Mục đích
Phát hiện nhanh Treponema pallidum từ bệnh phẩm của người.
Nguyên lý
Nếu trong bệnh phẩm có Treponema pallidum, vi khuẩn sẽ kết hợp với kháng thể đặc hiệu gắn huỳnh quang. Khi soi dưới kính hiển vi huỳnh quang sẽ thấy hình ảnh xoắn khuẩn phát sáng màu vàng xanh.
Chuẩn bị
Người thực hiện:
Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.
Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.
Phương tiện, hóa chất (ví dụ hoặc tương đương)
Trang thiết bị
Tủ an toàn sinh học cấp 2
Kính hiển vi huỳnh quang
Dụng cụ sấy lam (nếu có)
Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
|
STT |
Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao |
Đơn vị |
|
1 |
Lọ lấy bệnh phẩm |
lọ |
|
2 |
Que lấy bệnh phẩm |
cái |
|
3 |
Lam kính |
cái |
|
4 |
Nước muối sinh lý |
ml |
|
5 |
Thuốc nhuộm Treponema pallidum DFA |
ml |
|
6 |
Bông |
kg |
|
7 |
Cồn 900 (vệ sinh dụng cụ) |
ml |
|
8 |
Đèn cồn |
cái |
|
9 |
Panh |
cái |
|
10 |
Khay đựng bệnh phẩm |
cái |
|
11 |
Hộp vận chuyển bệnh phẩm |
cái |
|
12 |
Mũ |
cái |
|
13 |
Khẩu trang |
cái |
|
14 |
Găng tay |
đôi |
|
15 |
Găng tay xử lý dụng cụ |
đôi |
|
16 |
Quần áo bảo hộ |
bộ |
|
17 |
Acid ngâm lam |
ml |
|
18 |
Ống nghiệm thủy tinh |
ống |
|
19 |
Bút viết kính |
cái |
|
20 |
Bút bi |
cái |
|
21 |
Bật lửa |
cái |
|
22 |
Sổ lưu kết quả xét nghiệm |
tờ |
|
23 |
Cồn sát trùng tay nhanh |
ml |
|
24 |
Dung dịch xà phòng rửa tay |
ml |
|
25 |
Khăn lau tay |
cái |
|
26 |
Giấy trả kết quả xét nghiệm |
tờ |
|
27 |
QC (nếu thực hiện) * |
|
|
28 |
Ngoại kiểm (EQAS) (nếu thực hiện) * |
|
*Ghi chú:
Chi phí nội kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình nội kiểm (QC) là 1/10 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lượng ≥ 10 mẫu cho 1 lần tiến hành kỹ thuật).
Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).
Bệnh phẩm
Dịch cơ thể nghi ngờ có căn nguyên do Treponema pallidum gây bệnh: Tổn thương loét, đào ban, vết trợt, hạch…
Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông tin theo mẫu yêu cầu
Các bước tiến hành
Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.
Lấy bệnh phẩm
Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục).
Tiến hành kỹ thuật
Chuẩn bị tiêu bản
Nhuộm treponema pallidum dfa (direct fluorescent antibody)
Phủ dung dịch nhuộm huỳnh quang lên tiêu bản, để 2 phút
Rửa lại bằng nước để loại bỏ huỳnh quang thừa rồi để khô, soi dưới kính hiển vi huỳnh quang.
Nhận định kết quả
Treponema pallidum có hình ảnh xoắn khuẩn, bắt màu vàng xanh trên nền tím đen dưới kính hiển vi huỳnh quang.
Những sai sót và xử trí
Có thể gây âm tính giả nếu số lượng vi khuẩn quá ít.
