Mục đích và nguyên lý
Mục đích
Phát hiện sự có mặt bộ gen của Treponema pallidum có trong bệnh phẩm của người
Nguyên lý
Dựa trên nguyên lý kỹ thuật PCR.
Chuẩn bị
Người thực hiện
Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).
Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).
Phương tiện, hóa chất (ví dụ hoặc tương đương)
Trang thiết bị
Tủ an toàn sinh học cấp 2
Máy ủ nhiệt
Máy ly tâm > 12000 gpm/phút
Máy ly tâm dùng cho tube 0,2 ml
Máy vortex
Máy chạy PCR
Các loại Micropipette điều chỉnh được: 1000µl, 200µl, 100µl, 10µl
Máy điện di
Máy đọc ảnh gel
Lò vi sóng
Tủ lạnh thường
Tủ âm sâu (200C) ho c (-700C) (nếu có)
Bộ lưu điện
Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)
|
STT |
Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao |
Đơn vị |
|
|||
|
1 |
Dụng cụ lấy bệnh phẩm |
Ống |
|
|||
|
|
STT |
Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao |
Đơn vị |
|||
|
|
2 |
Khay đựng bệnh phẩm |
Cái |
|||
|
|
3 |
Hộp vận chuyển bệnh phẩm |
Cái |
|||
|
|
4 |
Găng không có bột (DNase-RNase free) |
Đôi |
|||
|
|
5 |
Sinh phẩm chẩn đoán |
Test |
|||
|
|
6 |
Khấu hao sinh phẩm cho mẫu chứng các loại, kiểm tra chất lượng |
Test |
|||
|
|
7 |
Kit tách chiết DNA/RNA |
Test |
|||
|
|
8 |
Ống Eppendorf 1,5 ml |
Tube |
|||
|
|
9 |
Ống Eppendorf 0,2 ml |
Tube |
|||
|
|
10 |
Đầu côn 10 ul có lọc |
Cái |
|||
|
|
11 |
Đầu côn 30 ul |
Cái |
|||
|
|
12 |
Đầu côn 200 ul có lọc |
Cái |
|||
|
|
13 |
Đầu côn 1 ml có lọc |
Cái |
|||
|
|
14 |
Ethanol BDH |
ml |
|||
|
|
15 |
Water-DEPC Treated |
ml |
|||
|
|
16 |
Thạch |
Gram |
|||
|
|
17 |
Ladder |
ml |
|||
|
|
18 |
Blue Juice Gel loading dye |
ml |
|||
|
|
19 |
Ethidium Bromide (hoặc Redgel) |
ml |
|||
|
|
20 |
TAE Buffer |
ml |
|||
|
|
21 |
Dung dịch khử trùng |
ml |
|||
|
|
22 |
Sổ lưu kết quả xét nghiệm |
Quyển |
|||
|
|
23 |
Giấy xét nghiệm |
Tờ |
|||
|
|
25 |
Bút viết kính, bút bi, diêm |
Cái |
|||
|
|
26 |
Xà phòng |
Bánh |
|||
|
|
27 |
Khăn lau tay |
Cái |
|||
|
|
28 |
Bông, cồn |
Túi |
|||
|
|
29 |
Nước muối sinh lý |
ml |
|||
|
|
30 |
Hộp lưu bệnh phẩm |
Cái |
|||
|
|
31 |
Quần áo bảo hộ |
Bộ |
|||
|
|
32 |
Mũ |
Cái |
|||
|
STT |
Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao |
Đơn vị |
|
|||
|
33 |
Khẩu trang |
Cái |
|
|||
|
34 |
Găng tay xử lý dụng cụ |
Đôi |
|
|||
|
35 |
Giấy thấm |
Cuộn |
|
|||
|
36 |
Ngoại kiểm EQAS (nếu thực hiện)* |
|
|
|||
Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/200 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 2 lần/1 năm).
Bệnh phẩm
Dịch cơ thể nghi ngờ có căn nguyên do Treponema pallidum gây bệnh: Tổn thương loét, đào ban, vết trợt, hạch…
Phiếu xét nghiệm
Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu
Các bước tiến hành
Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.
Lấy bệnh phẩm
Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (Xem Phụ lục).
Tiến hành kỹ thuật
Tách chiết DNA từ bệnh phẩm
Pha hỗn hợp phản ứng PCR
Chạy phản ứng PCR
Điện di sản phẩm PCR
Đọc kết quả
Nhận định kết quả
Phản ứng dương tính khi có sản phẩm PCR là một băng đặc hiệu duy nhất, rõ nét, không bị đứt gẫy và có kích thước tương ứng với đoạn gen đích cần khuếch đại.
Phản ứng âm tính nếu không có vạch sản phẩm PCR có kích thước tương ứng với đoạn gen đích cần khuếch đại.
Những sai sót và xử trí
Phản ứng dương tính giả: do tạp nhiễm từ môi trường
Phản ứng âm tính giả: do phản ứng PCR bị ức chế
Để hạn chế các hiện tượng trên phải tuân thủ chặt chẽ quy trình kỹ thuật.
