Nội dung

Treponema pallidum rpr định tính và định lượng

Mục đích và nguyên lý

Mục đích

Phát hiện kháng thể kháng kháng nguyên Cardiolipin trong huyết tương (huyết thanh) của người bệnh bị giang mai.

Nguyên lý

Kháng nguyên Cardiolipin gắn trên hạt than khi cho tiếp xúc với huyết tương (huyết thanh) người bệnh bị giang mai sẽ cho phản ứng dương tính biểu hiện bằng hiện tượng lên bông. 

Chuẩn bị

Người thực hiện

Người thực hiện: Cán bộ xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh.

Người nhận định và phê duyệt kết quả: Cán bộ xét nghiệm có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh.

Phương tiện, hóa chất

Phương tiện, hóa chất như ví dụ dưới đây hoặc tương đương.

Trang thiết bị

Máy ly tâm thường.

Máy lắc tròn.

Tủ lạnh 4°C – 8°C

Micropipette 50µl – 100 µl.

Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

Định mức sinh phẩm và vật tư tiêu hao cho 1 mẫu/lần thực hiện (VD).

STT

Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao

Đơn vị

Số lượng

1

Bông

Kg

0,001

2

Dây garô

Cái

0,001

3

Cồn

ml

1,000

4

Bơm kim tiêm

Cái

1,000

5

Panh

Cái

0,0001

6

Khay đựng bệnh phẩm

Cái

0,0001

7

Hộp vận chuyển bệnh phẩm

Cái

0,001

8

Tube đựng bệnh phẩm

Cái

1,000

9

Sinh phẩm RPR

Test

1,000

10

Khấu hao sinh phẩm RPR cho chạy chứng, kiểm tra chất lượng

Test

6,000

11

Đầu côn 200 µl

Cái

6,000

12

Giấy thấm

Cuộn

0,100

13

Giấy xét nghiệm

Tờ

2,000

14

Sổ lưu kết quả xét nghiệm

Tờ

0,001

15

Bút viết kính

Cái

0,020

16

Bút bi

Cái

0,010

17

Cái

0,020

18

Khẩu trang

Cái

0,020

19

Găng tay

Đôi

0,100

20

Găng tay xử lý dụng cụ

Đôi

0,020

21

Quần áo bảo hộ

Bộ

0,005

22

Dung dịch nước rửa tay

ml

8,000

23

Cồn sát trùng tay nhanh

ml

1,000

24

Dung dịch khử trùng

ml

10,000

25

Khăn lau tay

Cái

0,010

Bệnh phẩm

Huyết thanh hoặc huyết tương của người bệnh.  

Phiếu xét nghiệm 

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu.

Các bước tiến hành

Các bước tiến hành thực hiện theo phương tiện, hóa chất được ví dụ ở trên.

Lấy bệnh phẩm

Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh (xem phụ lục 2).

Từ chối những bệnh phẩm không đạt yêu cầu (xem phụ lục 6).

Tiến hành kỹ thuật

Bộ sinh phẩm RPR quicktest – Stanbio (VD).

Phản ứng rpr định tính

Các bước 

Nội dung thực hiện

1

Để sinh phẩm ở nhiệt độ phòng trước khi tiên hành phản ứng.

2

Nhỏ mẫu (Huyết thanh) vào một vòng tròn trên bìa phản ứng, để giọt rơi tự do. Chứng dương, chứng âm tương ứng theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

3

Dàn đều mẫu trong giới hạn vòng tròn.

4

Lắc nhẹ lọ kháng nguyên. 

Nhỏ 1 giọt kháng nguyên vào vòng tròn đã có mẫu. 

5

Không khuấy trộn. Để tấm phản ứng lên máy lắc và lắc ở tốc độ 100 vòng/phút trong 8 phút theo hướng dẫn của nhà sản xuất.

6

Đọc kết quả trực tiếp ở nơi có đủ ánh sáng. 

Phản ứng rpr định lượng

Thực hiện phản ứng bằng huyết thanh được pha loãng dần tới độ pha loãng lớn nhất còn cho kết quả dương tính. Pha loãng huyết thanh tiến hành với lượng gấp đôi: 1/2, 1/4, 1/8, 1/16…

Các bước

Nội dung thực hiện

1

Để sinh phẩm ở nhiệt độ phòng trước khi làm phản ứng.

2

Nhỏ 50 µl NaCL 9‰ vào vòng tròn trên bìa phản ứng từ số 2 – 5.

3

Nhỏ 50 µl mẫu vào vòng tròn 1 và 2. 

4

Pha loãng bậc hai từ vòng tròn 2. 

5

Dàn đều mẫu trong giới hạn vòng tròn.

6

Nhỏ kháng nguyên vào vòng tròn đã có mẫu.

7

Để tấm phản ứng lên máy lắc và lắc ở tốc độ 100 vòng/phút trong 8 phút.

8

Đọc kết quả trực tiếp ở nói có đủ ánh sáng.

Nhận định kết quả

phản ứng dương tính

Có các hạt kết cụm màu đen (hiện tượng lên bông) trên khắp mặt hoặc trung tâm vòng tròn của bìa phản ứng.

phản ứng dương tính yếu

Có ít các hạt kết cụm màu đen bao quanh rìa vòng tròn bìa phản ứng.

kết quả âm tính

Đám than hoạt tập trung ở giữa vòng tròn, màu xám đồng nhất.

Nhận định kết quả rpr định lượng

Hiệu giá

Vòng tròn

1

1:1

Vòng tròn

2

1:2

Vòng tròn

3

1:4

Vòng tròn

4

1:8

Vòng tròn

5

1:16

1:2

(+)

(+)

(-)

(-)

(-)

1:4

(+)

(+)

(+)

(-)

(-)

1:8

(+)

(+)

(+)

(+)

(-)

1:16

(+)

(+)

(+)

(+)

(+)

Những sai sót và xử trí

Phản ứng có thể dương tính giả trong một số bệnh: Lupus ban đỏ, bệnh sốt rét, bệnh phong, bệnh tăng tế bào đơn nhân nhiễm trùng, phụ nữ có thai… những trường hợp này cần làm thêm phản ứng TPHA để xác định chẩn đoán.

Tham khảo thêm hướng dẫn của nhà sản xuất.