Vibrio cholerae real-time pcr

Tác giả: Bộ Y tế
Cập nhật: 01/02/2021

Mục đích và nguyên lý

Mục đích

Xác định sự có mặt gen đặc trưng của Vibrio cholerae trong mẫu bệnh phẩm phân của người.

Nguyên lý

Dựa trên nguyên lý c a kỹ thuật Real-time PCR.

Chuẩn bị

Người thực hiện

Người thực hiện: Nhân viên xét nghiệm đã được đào tạo và có chứng chỉ hoặc chứng nhận về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Người nhận định và phê duyệt kết quả: Người thực hiện có trình độ đại học hoặc sau đại học về chuyên ngành Vi sinh (và/hoặc sinh học phân tử/ sinh học/công nghệ sinh học).

Phương tiện, hóa chất (ví dụ hoặc tương đương)

Trang thiết bị

Tủ an toàn Sinh học cấp 2

Máy Real-time PCR

Máy in màu

Máy ly tâm > 12000 gpm/phút

Máy ủ nhiệt

Máy vortex

Pipette

Dụng cụ, hóa chất và vật tư tiêu hao (bao gồm nội kiểm, ngoại kiểm)

STT	Chi phí hóa chất, vật tư tiêu hao	Đơn vị
1	Lọ lấy bệnh phẩm	Lọ
2	Panh	Cái
3	Khay đựng bệnh phẩm	Cái
4	Hộp vận chuyển bệnh phẩm	Test
5	Tube đựng bệnh phẩm	Cái
6	Găng không có bột (DNase-RNase free)	Cái
7	Sinh phẩm và vật tư tiêu hao cho chẩn đoán	Test
8	Khấu hao sinh phẩm cho chẩn đoán và kiểm tra chất lượng	Test
9	Kit tách chiết DNA	Test
10	Ống Eppendorf 1,5 ml	Tube
11	Ống Eppendorf 0,2 ml	Tube
12	Đầu côn 10 ul có lọc	Cái
13	Đầu côn 30 ul	Cái
14	Đầu côn 200 ul có lọc	Cái
15	Đầu côn 1 ml có lọc	Cái
16	Ethanol BDH	ml
17	Water-DEPC Treated	ml
18	Giấy thấm	Cuộn
19	Giấy xét nghiệm	Tờ
20	Sổ lưu kết quả xét nghiệm	Tờ
21	Bút viết kính	Cái
22	Bút bi	Cái
23	Mũ	Cái
24	Khẩu trang	Cái
25	Găng tay	Đôi
26	Găng tay xử lý dụng cụ	Đôi
27	Quần áo	Bộ
28	Dung dịch xà phòng rửa tay	ml
29	Cồn sát trùng tay nhanh	ml
30	Dung dịch khử trùng	ml
31	Khăn lau tay	cái
32	Ngoại kiểm (nếu có)*

Ghi chú: Chi phí ngoại kiểm cho quy trình kỹ thuật được tính cụ thể theo Chương trình ngoại kiểm (EQAS) là 1/50 tổng chi phí dụng cụ, hóa chất, vật tư tiêu hao (với số lần ngoại kiểm trung bình 3 lần/1 năm).

Bệnh phẩm

Bệnh phẩm phân

Phiếu xét nghiệm

Điền đầy đủ thông tin theo mẫu phiếu yêu cầu

Các bước tiến hành

Lấy bệnh phẩm

Theo đúng quy định của chuyên ngành Vi sinh.

Tiến hành kỹ thuật

Tách chiết DNA tổng số

Thực hiện Real-time PCR

Phân tích và đánh giá kết quả

In và trả kết quả

Thời gian thực hiện: 4 tiếng

Nhận định kết quả

Chứng dương phải xuất hiện đồ thị huỳnh quang trên đường giới hạn cơ bản, chứng âm không có bất kỳ đường đồ thị huỳnh quang nào xuất hiện.

Đường đồ thị huỳnh quang của mẫu có thể xuất hiện hoặc không xuất hiện trên đường giới hạn cơ bản, căn cứ vào đó để kết luận kết quả.

Những sai sót và xử trí

Trong trường hợp positive control (PC) và negative (NC) xuất hiện không đúng với diễn giải phần IV thì phải kiểm tra lại Master mix , chứng dương và quá trình tách DNA tổng số, và thực hiện lại toàn bộ xét nghiệm.

Nếu đường đồ thị huỳnh quang của mẫu xuất hiện ngoài chu kỳ thứ 40 thì phải cẩn thận kiểm tra và đánh giá lại mẫu.

Nội dung